Administration de médicaments ophtalmiques pour la neuromodulation non invasive dans un modèle murin

Résumé

Source : Zhan, J., et al. Stratégies non invasives pour la manipulation chronique de l’activité neuronale contrôlée par DREADD. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo présente une méthode d’administration de médicament ophtalmique non invasive pour la neuromodulation ciblée. Le médicament est administré par des gouttes ophtalmiques, absorbé dans la circulation, traverse la barrière hémato-encéphalique et active des récepteurs neuronaux spécifiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Administration répétitive de clozapine-N-oxyde (CNO) à l’aide de gouttes ophtalmiques

1. Acclimatez les animaux à la manipulation en égratignant chaque souris 3 minutes par jour pendant 3 à 4 jours avant l’administration de gouttes ophtalmiques.
2. Dissoudre le N-oxyde de clozapine (CNO, 5 mg) dans 1 mL de solution saline stérile à 0,9 % (solution mère : 5 mg CNO/mL). Conserver la solution au réfrigérateur à 4 °C.
3. Pesez chaque souris avant de commencer l’expérience pour déterminer la quantité de CNO à délivrer. Utilisez 1 à 3 μL de goutte (par œil) pour obtenir 1,0 mg de CNO/kg de poids corporel.
   REMARQUE : À titre d’exemple, une souris de 20 g devrait recevoir des gouttes ophtalmiques bilatérales (2 μL chacune).
4. Administrez les gouttes ophtalmiques pendant la phase inactive (lumière) des souris, 2 h avant que les lumières ne s’éteignent (heure zeitgeber (ZT) 10). Dans les cas où la CNO doit être administrée pendant la phase active (sombre) des souris, assurez-vous de la présence d’une lumière rouge tamisée pour une manipulation correcte des animaux.
   REMARQUE : Des précautions doivent être prises pour éviter de perturber le cycle circadien (et clair/sombre) des animaux de laboratoire.
   1. À l’aide d’une micropipette P10, chargez la quantité requise (1-3 μL) de solution CNO pour obtenir 1,0 mg de CNO/ kg.
      REMARQUE : Utilisez une pointe de pipette neuve et stérile pour chaque collyre. Dans cette série d’expériences, des gouttes ophtalmiques bilatérales de CNO ont été réalisées ; cependant, si une concentration plus faible de CNO est requise, des gouttes ophtalmiques unilatérales pourraient également être appliquées.
   2. Immobilisez la souris via la croûte.
   3. Expulsez lentement la solution jusqu’à ce qu’une gouttelette stable se forme sur la pointe de la pipette.
   4. Approchez délicatement la gouttelette de la cornée de l’œil de la souris jusqu’à ce que la solution soit distribuée. La pointe de la pipette ne doit jamais entrer en contact avec l’œil de la souris.
   5. Relâchez la souris et remettez-la dans sa cage d’origine.
5. Répétez cette procédure tous les jours pendant 5 jours.
   REMARQUE : Cette durée peut être ajustée en fonction des exigences expérimentales.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	Poudre lyophilisée ≥96 % (électrophorèse sur gel d’agarose)
C57BL/6J	souris The Jackson laboratory	#000664	souris mâles, 3 mois
Capillaries	Drummond Entreprise scientifique	#3-000-203-G/X	Diamètre extérieur : 1,14 po.
Clozapine-N-oxyde	Sigma	#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	Isoflurane,
USP Microinjector III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - Injecteur Nanoliter
Programmable Média de montage	Invitrogen	#P36930	Prolong Gold réactif anti-décoloration